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        小鼠ELISA試劑盒實驗方法
        瀏覽次數:125發布日期:2021-11-11

        小鼠ELISA試劑盒實驗方法

        首先要注意的是樣本處理及要求

        1.  血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

        2.  血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

        3.  組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。然后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

        4.  細胞培養物上清或其它生物標本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

        ELISA試劑盒

        其次需要而未提供的試劑和器材

        1. 酶標儀(450nm)

        2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

        3. 37℃恒溫箱

        4. 蒸餾水或去離子水


        最后實驗結果計算

        以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。

        1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

        2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

        3. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

        4. 請每次測定的同時做標準曲線,建議做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD 值大于標準品孔di一孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計算時請z后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

        5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

        6. 底物請避光保存。

        7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

        8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

        9. 本試劑不同批號組分不得混用。

        10. 試劑盒2-8℃冷藏,保質期6個月

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